倒置顯微鏡與相差顯微鏡有何區別？

　　倒置顯微鏡配備相差環(huán)板來(lái)實(shí)現相差

　　倒置生物顯微鏡通常屬于相差顯微鏡。倒置顯微鏡的透射光源在載物臺上，物鏡在載物臺下，故稱(chēng)“倒置顯微鏡”。倒置生物顯微鏡的透射光源和物鏡都是長(cháng)工作距離設計，通常會(huì )配備推拉式相差環(huán)板和相差物鏡，可實(shí)現相差觀(guān)察功能，以便觀(guān)察接近透明的未染色細胞等樣品。

　　正置顯微鏡也可以實(shí)現相襯觀(guān)察，只是相對少見(jiàn)。簡(jiǎn)易的正置相襯使用類(lèi)似倒置的推拉式相差環(huán)板，搭配帶插槽的聚光鏡，由于尺寸更小，精密度要求更高，而且可能還會(huì )有漏光等問(wèn)題，更可靠的設計是轉盤(pán)式切換的聚光鏡，這是很多正置顯微鏡實(shí)現相襯切換的思路。

　　相差可以觀(guān)察透明細胞樣本

　　相差顯微鏡指能進(jìn)行相差觀(guān)察的顯微鏡，相差觀(guān)察又稱(chēng)相襯觀(guān)察、澤尼克相襯法觀(guān)察，是一種利用相位差物理原理提升透明樣品對比度的技術(shù)，主要用于未染色的細胞等樣品，這些樣品在明場(chǎng)下幾乎是透明的，難以看清，而染色則會(huì )影響其活性因而不適用，通過(guò)相差觀(guān)察，樣品物質(zhì)和厚度的差異將會(huì )轉化成對比度，從而揭示明場(chǎng)觀(guān)察無(wú)法看清的細節。

　　相差不適合看厚的和楔形的樣品，升級DIC解決

　　相差觀(guān)察的優(yōu)點(diǎn)很明顯，它可以不用染色就看清培養皿中的細胞和水中的微生物等樣品，十分方便且實(shí)現成本低，局限在于不適合厚度大的樣品，以及楔型結構的樣品，這些樣品可能需要用DIC微分干涉相襯或者HMC霍夫曼調制相襯來(lái)進(jìn)行觀(guān)察，前者具有非常好的立體感和的細節表現能力，但成本高，后者雖然會(huì )有色差問(wèn)題，但能以顯著(zhù)更低的成本實(shí)現類(lèi)似DIC的強立體感，適合批量部署，因此在IVF輔助生殖等領(lǐng)域會(huì )有應用。

　　除常規相差，還有特殊的負相差

　　相襯觀(guān)察還有正負和對比度高低之分，常見(jiàn)的相襯是正相襯，背景是亮色的，樣品被高亮光環(huán)包圍。而負相襯背景呈暗色，類(lèi)似暗場(chǎng)，樣品主體會(huì )呈高亮。負相差物鏡有高對比（NH）和中對比度（NM）區別，會(huì )標記在物鏡上。

　　無(wú)限遠倒置熒光顯微鏡合成圖像

　　最后還有一點(diǎn)需要補充的是，固定筒長(cháng)顯微鏡和無(wú)限遠光學(xué)顯微鏡在相襯使用上的一個(gè)區別。在切換相襯和熒光觀(guān)察方式時(shí)，需要把光學(xué)元件移入和移出光路，對于固定筒長(cháng)顯微鏡來(lái)說(shuō)，額外的光學(xué)元件移入后，需要做補償以滿(mǎn)足固定筒長(cháng)需要，作為結果，不同觀(guān)察方式會(huì )有一定的成像倍率差異，視野不是一致的。

　　無(wú)限遠光學(xué)顯微鏡可以做到相襯成像視野和熒光成像視野一致，因此可以拍攝合成出有輪廓感/立體感的細胞熒光圖像。一般這需要先用平場(chǎng)消色差相襯物鏡拍攝相襯，然后切換到半復消色差物鏡拍攝熒光，以免損失熒光亮度，為了方便用戶(hù)進(jìn)行這種拍攝，明美還推出了半復消色差相襯物鏡，可以一個(gè)物鏡把相襯和熒光都拍好。